产品货号:
BTN81101
中文名称:
柱式昆虫DNA提取试剂盒
英文名称:
Insect DNA column extraction kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是专门用于从昆虫、节肢动物、蛔虫、扁形虫和一些富含多糖的动物组织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于去垢剂在适当的离子强度条件下,特异地跟基因组DNA结合形成沉淀,然后在用硅胶膜离心吸附法进行进一步纯化得到DNA。
- 适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的动物,包括昆虫、节肢动物、蛔虫和扁形虫等。
- 除新鲜样品外,还适合于各种保存状态的样品,包括冷冻的样品、用乙醇保存的样品和福尔马林保存的样品。
- 提取到的基因组DNA完整性,长度一般在20~50Kb。
- DNA纯净,OD260/280一般都在1.8左右,可直接用于PCR、酶切和杂交等。
- 操作简单,整个过程约30分钟。
- 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
- 本制品只能用于科研。
组分 | 规格 |
昆虫DNA纯化试剂溶液A | 50mL |
昆虫DNA纯化试剂溶液B | 50mL |
昆虫DNA纯化试剂溶液C | 50mL |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50mL |
DNA洗脱液(基因组纯化专用) | 10mL |
保存:室温,有效期1年。
本试剂盒足够50次微量提取,每次可以处理0.1~0.3g昆虫样品。
氯仿
- 称取0.1~0.3g昆虫样品转移到塑料研钵中,液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
- 最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵,因为DNA会吸附在表面,影响得率。
- 在离心管中加入1mL 65℃预热的昆虫DNA纯化试剂溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果昆虫DNA纯化试剂溶液A有沉淀,需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。
- 65℃保温5~30分钟,其间最好吹打混匀2~3次。
- 12000~15000g室温离心3分钟。
- 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。
- 在上清液中加入等体积的昆虫DNA纯化试剂溶液B,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色混浊。
- 将其置于冰浴中放置5~10分钟。
- 12000~15000g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
- 加入0.2mL的氯仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。
- 12000~15000g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物,小心转移上清到新1.5~5mL塑料离心管中。
- 由于下一步要加1.5倍体积的昆虫DNA纯化试剂溶液C,所以新的离心管的体积要足够大。
- 加入1.5倍体积的昆虫DNA纯化试剂溶液C,上下颠倒30秒混匀,然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
- 每次转移0.7~0.8mL混合液后,室温放置5~10分钟。
- 12000~15000g室温1分钟,弃穿透液。
- 对需要多次上柱的样品,可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中,重复第12~14步的操作。
- 将0.7mL通用洗柱液加入离心柱,室温离心1分钟,弃穿透液。
- 在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液,12000~15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
- 空甩1分钟去除残留液体。
- 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加入30~100μL DNA洗脱液2.0。
- 室温放置5分钟后离心1分钟,管底即为昆虫DNA溶液,可立即使用,也可长期保存在-20℃。
- 可以重复上步一次,以洗脱更多的DNA。
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